Ako používať eppendorfskú pipetu?

Keď vytlačím kvapalinu v špičke pipety do prijímacej nádoby s kvapalinou, mám niekoľkokrát stlačiť piest, aby som špičku vyčistil roztokom v prijímacej nádobe?

Pipety Eppendorf sú bežným laboratórnym nástrojom používaným na meranie a prepravu kvapaliny. Vzhľadom na náklady na tieto užitočné nástroje sa budete musieť starať o zachovanie ich stavu. Pipety majú tiež rôzne farebné špičky, ktoré predstavujú rôzne dávky.

Časť 1 z 3: nastavenie pipety

1
Skontrolujte tlačidlo piestu, aby ste sa uistili, že máte ten pravý. Aj keď ste si celkom istí, že máte ten pravý, chvíľu si pozrite tlačidlo piestu. Piest by mal udávať rozsah pipety.
- Ak má vaše laboratórium niekoľko pipiet a chytíte nesprávnu, môžete ho omylom nastaviť mimo jeho rozsah a spôsobiť mu trvalé poškodenie.
- Pipety spadajú do nasledujúcich rozsahov: P10 (0,5 až 10 µl), P20 (2 až 20 µl), P200 (20 až 200 µl), P1000 (200 až 1000 µl), P5000 (1 000 až 5000 µl).
2
V prípade potreby dajte na pipetu tip. Použitie pipety bez špičky by mohlo poškodiť jej citlivé vnútorné časti. Tipy by mali byť sterilné, ak vykonávate mikrobiologickú prácu. Hroty spravidla zapadajú na hriadeľ pipety a pevne zapadnú na svoje miesto.
- Ak pracujete na projekte, ktorý vyžaduje sterilné podmienky, dbajte na to, aby sa hrot nedotkol žiadneho kontaminovaného predmetu, ako sú vaše ruky alebo pracovná plocha.
- Číre špičky predstavujú rozsah 2 - 10 mikrolitrov (μl), žlté špičky 10 - 100 μl a modré špičky 100 až 1000 μl. Pri použití pipety vždy používajte jednorazový hrot.
3
Identifikujte časti pipety. Špička pipety by mala mať číry, žltý alebo modrý hrot. Po posunutí pipety hore bude za hrot plastový hriadeľ. Nad hriadeľom (a po jeho boku) je rameno z nehrdzavejúcej ocele, cez ktoré prechádza tekutina. Telo pipety bude mať nasledovné:
- Tlačidlo piesta v hornej časti (oproti jednorazovému koncu špičky).
- Tlačidlo vyhadzovača špičiek v spodnej časti tlačidla piestu.
- Ovládač hlasitosti pod tlačidlom vyhadzovania.
- Mikrometer z nerezovej ocele pod Nastavenie hlasitosti voľby.
- Indikátor objemu na prednej strane pipety.
4
Správnou manipuláciou zabráňte poškodeniu pipety. Otáčaním gombíka na nastavenie hlasitosti mimo horného alebo dolného rozsahu by sa pipeta mohla poškodiť. Pipetu držte vzpriamene, kedykoľvek obsahuje tekutinu. Jeho nastavenie na bok môže spôsobiť, že tekutina prenikne do chúlostivých častí pipety.
- Po vytiahnutí tekutiny do pipety alebo jej vypustení nenechajte piest zaklapnúť dozadu. Mohlo by to spôsobiť poškodenie piestu vo vnútri pipety.
5
Pipetu upravujte, kým nedosiahnete požadovaný objem. Vaša pipeta môže mať malé čierne bezpečnostné tlačidlo, ktoré je potrebné stlačiť pri otáčaní voliča nastavenia hlasitosti. Ak nie, budete musieť najskôr vytiahnuť gombík, kým ho budete môcť nastaviť, ale nezabudnite zapnúť gombík späť, keď je pipeta nastavená.
- Ovládačom hlasitosti manipulujte ľahkou silou a nikdy neotáčajte, ak pociťujete odpor. Otáčanie gombíka v smere odporu môže poškodiť vašu pipetu.

Skontrolujte tlačidlo piestu, aby ste sa uistili, že máte ten pravý.

Časť 2 z 3: kresba (nasávanie)

1

Stlačte piest, kým sa nedostane k prvej zastávke. Akonáhle v pieste pocítite odpor, nastavili ste ho tak, aby vytiahol množstvo nastavené ovládačom hlasitosti. Jemne zatlačte piest; môžete tlačiť za prvou zastávkou, ak budete ignorovať odpor, ale nie je to doporučené.
2
Jednorazový hrot pipety ponorte do tekutiny. Držte pipetu v uhle 90°, aby vytvorila tvar L s povrchom kvapaliny. Ak je to možné, držte hrot asi 0,64 cm od dna nádoby s kvapalinou. Hriadeľ pipety však neponárajte do kvapaliny.
- Dávajte pozor, aby ste špičkou pipety netlačili na dno nádoby s tekutinou. Mohlo by to tiež spôsobiť poškodenie pipety.
3
Do pipety natiahnite tekutinu. Keď je hrot ponorený, použite tlačidlo piestu, aby sa piest mohol vrátiť do východiskovej polohy (úplne vysunutý). Robte to pomaly, aby piest nevypadol.
- Pred pohybom pipety počkajte niekoľko sekúnd, kým sa piest vráti do pôvodnej polohy. Tým sa zabezpečí, že bolo odobraté celé množstvo tekutiny.

Telo pipety bude mať nasledovné: Piestové tlačidlo v hornej časti (oproti jednorazovému koncu špičky).

Časť 3 z 3: výdaj

1

Umiestnite pipetu nad nádobu na príjem. Vyberte hrot pipety z kvapaliny. Pipetu umiestnite pod uhlom tak, aby sa jej hrot dotýkal bočnej steny nádoby na príjem a zvieral uhol 45° (na polceste medzi hore a dole a plocho).
2

Tekutinu nalejte do nádoby na príjem. Ak už je v prijímacej nádobe tekutina, držte pipetu tak, aby bola jej koncovka tesne nad povrchom alebo mierne nad dnom nádoby. Jemne zatlačte piest na prvú zarážku, aby sa tekutina uvoľnila.
3

Stlačením piestu na druhú zarážku odstráňte kvapalinu. Kým je pipeta stále v nádobe, počkajte niekoľko sekúnd, kým je piest zapojený do prvej zastávky. Teraz ste pripravení stlačiť piest na druhú zarážku, aby ste odstránili všetku tekutinu, ktorá je stále v špičke.
4

Vyberte pipetu z nádoby na príjem. Po dosiahnutí druhej zastávky pokračujte v držaní piestu. Vyberte pipetu z obalu a pomaly uvoľňujte piest, kým sa nevráti do pôvodnej (úplne roztiahnutej) polohy.
5

Zlikvidujte hrot a pipetu vráťte na bezpečné miesto. Špičku je možné ľahko odstrániť pomocou tlačidla na vysunutie špičky. To však spôsobí, že špička bude z pipety odpružovať. Pred stlačením vyhadzovacieho tlačidla sa uistite, že je špička nasmerovaná na vhodnú zásuvku, a potom pipetu odložte.

A potom pipetu odložte — Pred stlačením tlačidla vyhadzovača sa uistite, že je špička nasmerovaná na vhodnú zásuvku, a potom pipetu odložte.

Tipy

Jednorazové tipy sa dajú ľahko získať vo veľkom. Ak teda máte pocit, že ste svoj tip znečistili, urobte chybu na opatrnosti a zaobstarajte si nový tip.
Ak máte problémy s ustálením ruky, skúste položiť lakeť na pult/povrch.
Cvičte s vodou a farbivom, ak si nie ste istí, že to zvládnete aj na prvý krát.

Varovania

Pipety Eppendorf sú krehké nástroje, ktoré sa dajú ľahko poškodiť. Vzhľadom na ich relatívne vysoké náklady by ste s týmto nástrojom mali zaobchádzať opatrne.
Ak počas vytiahnutia hrotu z tekutiny nedržíte piest, nemôžete do seba nabrať všetku tekutinu.

Veci, ktoré budete potrebovať

Eppendorfova pipeta
Kvapalina
Prijímací kontajner (ako kadička alebo skúmavka)
Rukavice (ak pracujete s nebezpečnou tekutinou alebo tekutinou, ktorá by mohla spôsobiť podráždenie pokožky)
Ochranné okuliare (ak pracujete s kvapalinou, ktorá by mohla spôsobiť podráždenie očí)

Prečítajte si tiež: Ako vyrobiť pálené vápno?