Ako vykonať kapsulárnu škvrnu?
Z tohto dôvodu sa musí vykonať kapsulárna škvrna nazývaná metóda Anthony.
Farbenie organizmu glykokalyxom alebo kapsulou zahŕňa špecifický súbor pokynov. Tento postup je odlišný od bežného farbenia hlavne kvôli kroku tepelného fixovania. Ak baktériu tepelne zafixujete kapsulou, použije mechanizmus a zmenší alebo zničí jej glykokalyx. Keď sa to stane, nebudete môcť v škvrne vidieť mikroorganizmus. Z tohto dôvodu je potrebné vykonať kapsulárnu škvrnu nazývanú metóda Anthony.
Metóda 1 z 3: Príprava snímky
- 1Vložte očkovaciu slučku do skúmavky so zapuzdrenými baktériami a získajte slučku tohto organizmu. Použitou baktériou môže byť Steptococcus pneumoniae alebo Klebsiella pneumoniae. Pretože tieto organizmy sú fakultatívne anaeróby, zhromažďujú sa väčšinou v hornej časti skúmavky. Skúste nabrať baktériu v danej oblasti.
- 2Na očkovaciu slučku pripravte tenkú vrstvu alebo svoj organizmus na sklíčko mikroskopu. Očkovaciu slučku môžete vyhodiť do odpadu. Neohrievajte.
- 3Náter vysušte na vzduchu. Aby ste tento proces urýchlili, môžete jemne mávnuť sklíčkom vo vzduchu tam a späť.
- 4Po zaschnutí naneste náter 2-3 kvapkami 1% kryštálovej fialky na 2 minúty, aby sa zafarbila vaša baktéria.
- 5Sklíčko umyte 20% síranom meďnatým do vhodnej odpadovej nádoby. Síran meďnatý neumývajte do drezu.
- 6Vysušte sklíčko. Jemne ho prelepte biblickým papierom. Ak sa budete silne blotovať, môže to zlomiť sklíčko.
Keď sa to stane, nebudete môcť v škvrne vidieť mikroorganizmus.
Metóda 2 z 3: Preskúmanie snímky
- 1Vytiahnite mikroskop zloženého svetla. Očistite šošovky od predchádzajúceho vyšetrenia olejom na šošovkách. Vezmite sklenenú podložnú sklíčko, organizmus nahor, a prichyťte ho na pódium svojho svetelného mikroskopu sponami, ktoré ho držia na svojom mieste. V prípade potreby posúvajte posúvačom dopredu a dozadu pomocou koliesok nastavenia stupňa, aby ste sa presvedčili, že časť skúmavky, ktorú skúmate, je umiestnená pod šošovkou objektívu.
- 2Pripojte a zapnite mikroskop zloženého svetla. Váš objektív by mal byť nastavený na najmenší výkon, ktorý je 10x. Tu veľa neuvidíte, ale tento krok slúži na zaostrenie vášho mikroskopu. Na premiestnenie šošovky objektívu použite nosný kryt.
- 3Na zaostrenie diapozitívu použite gombík hrubého nastavenia na boku mikroskopu. Môže posúvať stolík alebo hornú časť mikroskopu. Otáčajte týmto gombíkom, kým sa váš preparát nezaostrí. Nebojte sa, že by sa šošovka dostala do kontaktu so sklíčkom a zlomila ho, existuje zarážka, ktorá tomu zabráni. Toto by sa malo používať iba na objektívoch s nízkym výkonom. Pri prechode na ďalšie zväčšenie objektívu by to nemalo byť potrebné.
- 4Pomocou kolieska jemného nastavenia na boku mikroskopu dolaďte zaostrenie svojej vzorky. Akonáhle identifikujete štruktúru, ktorú chcete bližšie preskúmať, prejdete na vyššie zväčšenie. Na tento mikroorganizmus chceme použiť olejové ponorenie na zvýšenie zväčšenia. Olej bude vytvárať súvislý systém šošoviek, ktorý znižuje stratu svetla. To spôsobí zvýšenie rozlíšenia.
- 5Na 100 -násobnú šošovku objektívu použite ponorný olej. Ak chcete použiť olej, otočte nosný držiak tak, aby bol umiestnený medzi 40X a 100X.
- 6Na sklíčko, kde je organizmus rozmazaný, naneste kvapku ponorného oleja. Potom sa jemne presuňte na 100 -násobné zväčšenie a olej sa stretne s šošovkou. Potom môžete znova použiť koliesko jemného zaostrovania, aby sa vaše baktérie lepšie zaostrili. Svetlo môžete tiež nastaviť pomocou ovládača intenzity svetla.
- 7Prezrite si svoje sklíčko pod olejovým ponorom. Kapsuly by ste mali identifikovať ako svetlo modré a bunky budú vyzerať ako tmavo purpurové.
Na očkovaciu slučku pripravte tenkú vrstvu alebo svoj organizmus na sklíčko mikroskopu.
Metóda 3 z 3: čistenie
- 1Keď ste hotoví, pomocou gombíka hrubého nastavenia posuňte pódium úplne nadol alebo hornú časť mikroskopu úplne hore.
- 2Použitím okulára na šošovky objektív vráťte na najnižší výkon.
- 3Objektív mikroskopu očistite tkanivom, teplou vodou a zeleným mydlom alebo xylénom.
- 4Vyberte sklíčko a vyčistite etanolom. Môžete ho nechať uschnúť na vzduchu.
- 5Vypnite mikroskop a naviňte kábel. Tým sa kapsulárna škvrna dokončí.
- Ak po vykonaní týchto krokov máte stále problém vidieť svoju baktériu pod mikroskopom, môže to byť preto, že...
- Bola tam špinavá šošovka- V takom prípade šošovku dobre utrite tkanivom na šošovky, teplou vodou a zeleným mydlom alebo xylénom.
- Kryštálová fialová stála nesprávny čas- V tejto situácii budete musieť začať odznova. Tentoraz sa uistite, že kryštálová fialka stojí iba 2 minúty. Ak nie, môže to narušiť vašu baktériu.
- Príliš veľa kryštálovej fialky- Pri vykonávaní týchto krokov naneste iba 2-3 kvapky kryštálovej fialky. Použitie príliš veľkého množstva kryštálovej fialky môže narušiť farbu vašej kultúry.
- Očné úpravy na mikroskope sú potrebné- Predtým, ako začnete odznova, upravte svoje očné viečka. Ak chcete zmeniť vnútroočnú vzdialenosť, vytiahnite očká od seba alebo ich pritlačte k sebe. Toto sa pravidelne mení, pretože používatelia majú rozdielne oči.
- Kondenzátor na mikroskope môže potrebovať úpravu- Kondenzátor je šošovka pod pódiom, ktorá zhromažďuje a smeruje svetlo z lampy na diapozitív. To sa dá posúvať hore a dole pomocou gombíka priamo pod pódiom. Skúste to skôr, ako začnete odznova.
- Membrána na mikroskope potrebuje úpravu- Membrána je v kondenzátore a reguluje množstvo svetla, ktoré dopadá na sklíčko. Môžete to skúsiť upraviť po umiestnení membrány na mikroskop a potom pokračovať späť na krok 1.
- Baktérie mohol byť mŕtvy v skúšobnom tube- V takom prípade budete musieť získať novú kultúru zapuzdrené baktérie. Niektoré kultúry počas inkubačného procesu hynú, ak nie sú správne inkubované.
- Na podložné sklíčko sa naočkovalo z očkovacej slučky nedostatočné množstvo organizmu- Po vyčistení sklíčka a začiatku kroku 1 sa uistite, že sa pokúsite zachytiť baktérie zhora.
- Tento druh bol rozmazaný pri odstraňovaní diapozitívov- Ak sa budete mazať alebo otrieť príliš agresívne, môžete vymazať organizmus, ktorý chcete pozorovať. Nabudúce buď veľmi jemný. Sušenie sklíčka nevyžaduje veľa času, buďte trpezliví.
Po zaschnutí naneste náter 2-3 kvapkami 1% kryštálovej fialky na 2 minúty, aby sa zafarbila vaša baktéria.
- Zapuzdrená baktéria, ako napríklad Streptococcus pneumoniae alebo Klebsiella pneumoniae.
- 1% kryštálová fialka
- 20% vodný síran meďnatý
- Dezinfekčné roztoky na podložné sklíčka (70% etanol)
- Odpadová nádoba na síran meďnatý
- Očkovacia slučka
- Biblický papier
- Zložený mikroskop
- Ponorný olej
- Tkanivo nepúšťajúce vlákna alebo tkanivo šošovky
- Zelené mydlo alebo xylén
- Sklíčko mikroskopu
Prečítajte si tiež: Ako vypočítať uhlové zrýchlenie?
