Ako uložiť vzorky húb zmrazené v glycerole?
Tieto pokyny opisujú postup funkčného uloženia vzoriek húb zmrazených v glycerole na pripravené Petriho misky. Ak dôjde k rastu, tieto vzorky je možné extrahovať na izoláciu a sekvenovanie ich DNA na budúce použitie. Tieto smery boli prispôsobené slovným a vizuálnym pokynom skúsených genetikov.
- 1Nasaďte si rukavice!
- 2Dno nádoby na polystyrén navrstvite na ľadové obaly z chladničky, 1 vrstva je v poriadku.
- 3Vyberte škatuľu so vzorkami glycerolu a vložte ju do nádoby s penou.
- 4Krabicu prikryte 1 alebo 2 ďalšími balíčkami ľadu a zatvorte nádobu.
- 5Postavte si laboratórnu lavicu. To zahŕňa zapálenie horáka a kontrolu, či je dúchadlo zapnuté pre laboratórnu lavicu.
- 6Laboratórnu lavicu nastriekajte 70% etanolom a utrite kimwipe.
- 7Rukavice postriekajte 70% etanolom a napeňte do sucha.
- 8Nádobu na penu umiestnite vedľa nôh.
- 9Otvorte nádobu na penu a škatuľku so vzorkami a vytiahnite prvú vzorku, ihneď dajte zvyšné balíčky ľadu na zvyšok vzoriek a zatvorte nádobu z polystyrénu.
- 10Podľa toho označte prvú Petriho misku.
- 11Otvorte vzorku a položte viečko hore nohami na lavicu.
- 12Uchopte vzorku do ľavej a pravej ruky. Ponorte slučku do 95% etanolu a zapáľte ju.
- 13Začnite na konci, ktorý je najbližšie k držadlu, a ohnite slučku, kým nie je červená; prepracujte sa až na koniec slučky.
- 14Petriho misku otvorte prázdnou rukou, pričom stále držte vzorku.
- 15Uistite sa, že koniec slučky je veľmi červený. Rýchlo ho prilepte do mrazenej vzorky glycerolu. Úplné zavedenie konca slučky do vzorky môže trvať niekoľko pokusov.
- 16Keď na slučke zreteľne uvidíte vzorku, zľahka ju naneste najskôr na filtračný papier a uistite sa, že je úplne zakrytá, potom pokračujte v ľahkom rozotieraní na zvyšok Petriho misky (nechcete zoškrabať agar). To s najväčšou pravdepodobnosťou vezme 2 alebo viac ponorov do vzorky.
- 17Keď je celá Petriho miska zakrytá, vložte slučku do nádoby s 95% etanolom. Zatvorte Petriho misku a vzorku.
- 18Vložte vzorku späť do škatule. Uistite sa, že sa na vzorkách nachádza ľad a zatvorte nádobu s polystyrénom.
- 19Parafilm Petriho misku a odlož.
- 20Kroky 8 -17 opakujte toľkokrát, koľkokrát je to potrebné.
- Ak ste ľavák, pokojne sa tomu prispôsobte.
- Spätná kontrola vašich označených jedál do skúmaviek by mohla byť užitočná, ak stratíte počítanie alebo zabudnete, kde ste v predchádzajúci deň skončili.
- Dôležité: Kroky 8-17 by mali byť dokončené bez úplného skvapalnenia vzorky. Ak nie ste schopní dokončiť kroky 8-17 skôr, ako sa vzorka úplne skvapalní, držanie vzorky malým kúskom penového obalu spomalí proces rozmrazovania.
Zariadenie
- Horák
- Gumové rukavice
- Slučka
Materiály
- Ľadové balíčky
- Veľká nádoba na penu
- Vzorky mrazeného glycerolu
- 70% etanol v striekacej fľaši
- 95% etanol v malej sklenenej nádobe
- Parafilmové prúžky
- Petriho misky s filtračným papierom
- Krabica Kimwipes
- Fixka
Prečítajte si tiež: Ako zaobchádzať s bezvodým amoniakom?